DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定

摘要：

目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白.方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEMR-T Easy 载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30a中,在E.coli BL21(DE3)实现蛋白表达.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体(mAb)结合能力.结果:克隆到人DR5基因的胞外段基因,测序结果和报道的一致;构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E.coli BL21(DE3)中大量表达;SDS-PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量(Mr)一致;Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应,竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制.结论:成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区,为后续研究打下了基础.

关键词：DR5、RT-PCR、原核表达

所属期刊栏目：23

分类号：R730.51(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30571697

在线出版日期：2007-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：791-793