IL-1β反义RNA在HepG2细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响

摘要：

目的:构建IL-1β反义RNA真核表达载体, 转染HepG2细胞, 探讨阻断IL-1β作用后对其NK细胞杀伤敏感性的作用.方法:RT-PCR方法扩增两段基因序列IL-1β1(17-331, 315 bp)和IL-1β2(246-505, 260 bp), 经T-A克隆后构建反义RNA表达载体pcDNA3.0-antiIL1β1和pcDNA3.0-antiIL1β2.采用阳离子聚合物(jetPEI)的方法转染HepG2肝癌细胞, RT-PCR方法检测反义RNA的表达水平, 胞内因子染色的方法分析IL-1 的表达水平, MTT方法分析NK-92细胞对HepG2杀伤活性的变化.结果:以LPS刺激的人PBMC总RNA为模板, RT-PCR扩增得到两个约315 bp和260 bp的基因片段, 先构建克隆载体pMD18 T-IL-1β1和pMD18 T-IL-1β2, 质粒PCR、 Xho I酶切和DNA序列分析正确后, 利用Pfu DNA聚合酶进行PCR, 产物纯化后经EcoR I、 Xho I双酶切, 反向插入pcDNA3.0, 获得人IL-1β反义RNA真核表达载体pcDNA3.0-antiIL-1β1和pcDNA3.0-antiIL-1β2.PCR、 Pst I酶切和DNA序列分析正确后, 将其分别转染HepG2细胞, RT-PCR检测显示HepG2细胞能够高水平表达两种反义RNA, 胞内因子染色发现IL-1β的表达水平明显下降, 同时该细胞对NK-92杀伤的敏感性明显升高, 其中IL-1β1反义RNA的作用更为显著, 效靶比10:1时, NK细胞对HepG2的杀伤活性提高了约20%.结论:以促炎性细胞因子IL-1β为靶点进行干预, 能够有效地下调肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗能力.

关键词：肝癌细胞、IL-1β、反义RNA、NK细胞、天然免疫

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分类号：R392.12

资助基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金2004BSB14074;教育部科学研究项目重点项目205090;山东省卫生系统重点科技人才基金2006年

在线出版日期：2007-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：719-722