分离培养人外周血CD4+CD25-T细胞及其生物学特性研究

摘要：

目的:分离培养人外周血CD4+CD25-T细胞, 并鉴定其生物学特性.方法:设对照组(A组)、LPS组(B组)、LPS+抗TGF-β1 mAb组(D), 用Percoll不连续密度梯度离心与免疫磁珠法,分离培养健康人外周血CD4+CD25-T细胞.用光镜及电镜观察其形态特征, 台盼蓝试验检测其活力, 流式细胞术(FCM)鉴定其纯度.体外培养4 h、 3 d及5 d后, 用FCM检测CD4+CD25+T 细胞的阳性率, ELISA法检测培养上清中TGF-β1的浓度, RT-PCR法检测细胞中叉状头/翼状螺旋转录因子(FOXP3)mRNA的表达.结果:(1)光镜下观察分离的CD4+CD25-T细胞主要为小体积细胞, 电镜下观察细胞核呈圆形, 染色质致密.体外抗人CD3/CD28 mAb刺激培养的CD4+CD25-T 细胞体积逐渐增大, 胞质较丰富, 电镜下观察细胞核呈椭圆形或肾型, 染色质较稀疏.(2)FCM检测CD4+CD25-T细胞纯度达91.5%～96%.台盼蓝试验检测分离前后活细胞数无统计学意义(P＞0.05).(3)FCM检测表明, B5d组为CD4+CD25+T细胞的阳性率为(55.99±1.42)%与A5d组相比较有统计学意义(P＜0.01);D5d组CD4+CD25+T细胞的阳性率为(1.99±0.83)%与A5d组的阳性率(1.29±0.04)%相比较无统计学意义.(4)ELISA测定表明, 培养液中TGF-β1的浓度, B3d组为(1.60±0.09) μg/L、 B5d组为(1.83±0.14) μg/L, 分别与A3d组为(0.35±0.04) μg/L、 A5d组为(0.33±0.08) μg/L相比较, 均有统计学意义(P＜0.01);而D3d、 D5d组与A3d、 A5d组相比较均无统计学意义.(5)RT-PCR检测表明, FOXP3 mRNA的表达:以β-actin的A值作为内参照, B3d组为(0.84±0.07)、 B5d组为(1.85±0.24)分别与A3d组(0.05±0.02)、 A5d组(0.04±0.02)相比较, 均有统计学意义(P＜0.01);而D组与A组的各个组间相比较均无统计学意义.(6)LPS诱导的人外周血中CD4+CD25-T细胞培养液上清中TGF-β1的水平与该细胞中FOXP3 mRNA的表达呈显著的正相关(r=0.812, P＜0.01).结论:用Percoll不连续密度梯度离心与免疫磁珠法体外分离培养的人外周血CD4+CD25-T细胞的活力及纯度较理想;LPS诱导的CD4+CD25-T细胞中FOXP3 mRNA的表达, 可能与TGF-β1有关.

关键词：T淋巴细胞亚型、转化生长因子、叉状头/翼状螺旋转录因子、脂多糖

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分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金30571981;浙江省自然科学基金Y205426

在线出版日期：2007-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：711-714