小鼠睾丸生精新基因SRG4原核表达与纯化

摘要：

目的:原核表达小鼠睾丸生精新基因SRG4, 并对重组蛋白进行纯化, 为研究SRG4的生物学功能奠定基础.方法:应用RT-PCR从小鼠睾丸中扩增SRG4 C端包含一个Sad1_UNC like domain的587 bp片段, 将PCR产物克隆至pUCm-T载体.随后, cDNA片段亚克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE-30中, 测序鉴定.将重组质粒PQE-30-SRG4转化大肠杆菌M15, IPTG诱导, 表达产物以Western blot进行鉴定, 并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化.结果:成功地构建了原核表达质粒PQE-30-SRG4.IPTG诱导4 ～5 h, SRG4融合蛋白表达量达最高.Western blot分析证实, IPTG诱导表达的蛋白是SRG4融合蛋白.Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的SRG4融合蛋白.结论:重组质粒PQE-30-SRG4能在大肠杆菌M15中表达, 包含Sad1_UNC like domain的纯化SRG4融合蛋白可用于研究SRG4在精子发生中的生物学功能.

关键词：SRG4、克隆、原核表达、融合蛋白、精子发生

所属期刊栏目：23

分类号：Q38(动物遗传学)

资助基金：国家自然科学基金30600681;湖南省自然科学基金05JJ40044

在线出版日期：2007-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：701-703