全人源性肝癌单链抗体的表达、纯化及功能鉴定

摘要：

目的:在大肠杆菌中表达人源性肝癌单链抗体(scFv), 并分析他的结合活性.方法:应用噬菌体表面呈现技术获得人源性肝癌scFv, 利用重叠延伸PCR将VL和VH基因以(Gly4ser)3 linker连接成单链, 插入表达载体pET28a(+), 诱导目的蛋白表达, 对包涵体进行溶解、复性、纯化, 得到可溶性目的蛋白, 应用非竞争细胞ELISA检测与肝癌细胞结合的特异性及结合能力.结果:在A600为0.8时开始诱导, 持续6 h, 目的蛋白表达量占菌体总蛋白的26%, 包涵体经过复性纯化后, 得到纯度达到95%的重组scFv, 其亲和常数为:3.6×107 mol/L.结论:实现了人源性肝癌scFv的蛋白表达, 抗体蛋白与肝癌细胞具有较强的特异性结合能力, 为今后进行免疫学检测和开发肿瘤靶向治疗提供了研究手段.

关键词：肝癌、单链抗体、表达、生物活性

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金59637050

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：649-651,656