稳定表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞株的建立及其免疫原性分析

摘要：

目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅢex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性.方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后, 用G418筛选阳性克隆, 得到多个细胞克隆.采用免疫组化和Western blot法鉴定这些细胞克隆.选取高表达EGFRvⅢex的细胞株(命名为3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠, 制备抗血清.用ELISA、Western blot和免疫荧光分别检测抗血清的效价和特异性.结果:成功地构建了真核表达载体pLNCX2-EGFRvⅢex并获得了稳定高表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞系3T3-vⅢex.用3T3-vⅢex免疫小鼠所获得的抗血清效价为10 -5.Western blot和免疫荧光鉴定证明抗血清可以与EGFRvⅢex特异结合.结论:人EGFRvⅢex可在NIH3T3细胞内获得稳定表达, 以其免疫小鼠可以获得高效价、高特异性的抗血清.

关键词：NIH3T3、表皮生长因子受体突变体Ⅲ、稳定细胞系、免疫原性、抗体

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：上海市科学技术委员会专项基金重点项目054119568

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：612-615