宫颈癌相关新癌基因hWAPL的原核表达和免疫原性分析

摘要：

目的: 构建hWAPL原核表达载体, 诱导hWAPL蛋白表达并制备其多克隆抗体.方法: RT-PCR技术扩增hWAPL cDNA片段, 连接到pMD18-T载体, 测序正确后亚克隆入原核表达载体pET28a并转化BL21菌株, 用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况, 制备hWAPL蛋白并免疫BALB/c小鼠, ELISA法测定其抗体效价, Western blot鉴定表达hWAPL蛋白的免疫原性.结果: ①经PCR、双酶切鉴定和测序, 证实hWAPL正确插入pMD18-T载体, 序列正确.②经IPTG诱导的pET28a-hWAPL重组菌表达出相对分子质量(Mr)约为25 000的蛋白, 与预期蛋白Mr相符.③免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1∶ 3 200.④Western blot结果显示Mr约25 000处有反应蛋白条带.结论: pET28a载体能够表达hWAPL蛋白, 表达蛋白具有良好的免疫原性, 其免疫小鼠后获得的多克隆抗体具有高效价和特异性.

关键词：hWAPL、原核表达、多克隆抗体、宫颈癌

所属期刊栏目：23

分类号：R392.7

资助基金：陕西省科技攻关项目2003k10- G49

在线出版日期：2007-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：562-564