人核糖体蛋白S13的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

目的:克隆人核糖体蛋白S13(ribosomal protein S13, RPS13)cDNA全长, 构建原核表达质粒, 诱导表达、纯化RPS13蛋白并制备其多克隆抗体.方法:应用RT-PCR方法从胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增出RPS13的cDNA全长, 利用DNA重组技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-RPS13, 双酶切及测序鉴定.将重组载体转化入大肠杆菌BL21中, 筛选抗性克隆并经DNA测序证实.IPTG诱导融合蛋白的表达, 利用镍离子亲和层析柱提纯融合蛋白, 经SDS-PAGE和Western blot鉴定.用纯化的融合蛋白His-RPS13免疫BALB/c小鼠, ELISA法测定抗体效价, 饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体, Western blot检测抗体活性.结果:RT-PCR扩增片段与预计目的基因片段大小一致;双酶切鉴定表明,重组表达载体pET-28a(+)-RPS13构建成功, DNA测序结果显示所获基因序列与GenBank中收录完全相同.IPTG诱导3 h后, 经SDS-PAGE检测显示在Mr 19 000处出现一新生条带, 与预计的融合白大小一致;利用抗His标签的抗体进行Western blot, 结果证实融合蛋白表达成功.其免疫血清经Western blot证实可特异性的识别蛋白RPS13.结论:成功地获得了RPS13的编码基因序列, 并获得了纯化的RPS13蛋白质, 为制备RPS13的单克隆抗体、进一步研究RPS13在肿瘤中的作用奠定了基础.

关键词：核糖体蛋白S13、原核表达、融合蛋白、纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：23

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30530780;30670971;第四军医大学校科研和教改项目2005年

在线出版日期：2007-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：363-366