人源抗NH-LBP Fab抗体的制备和初步鉴定

摘要：

目的:构建人源抗脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)Fab抗体的原核表达载体, 并制备高稳定性Fab抗体.方法:用PCR方法, 从可溶性表达抗NH-LBP抗体的重组质粒pComb3H-Fab中扩增出VH链和VL链基因序列, 分别构建表达质粒pET-28a(+)-VH和pET-28a(+)-VL, 并于工程菌BL21(DE3)star中分别表达及TALON柱芯亲和纯化, 将抗体片段VH和VL共同复性, 通过二硫键形成Fab抗体, 再采用ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力.结果:扩增出VL链和VH基因片段长约为650 bp和700 bp, 经BL21star表达出相对分子质量(Mr)约为28　000和30　000的目的蛋白, 共同折叠后所获得Fab抗体与NH-LBP具有较高的结合力.结论:成功地制备抗NH-LBP Fab抗体, 为临床抗炎研究提供了条件.

关键词：脂多糖结合蛋白氨基端片段(NH-LBP)、人源抗体Fab、高效表达

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30400426;第三军医大学校科研和教改项目2004年

在线出版日期：2007-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：359-362