QKI蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:获得原核表达的RNA结合蛋白QKI-7蛋白, 并制备其兔抗QKI多克隆抗体.方法:将成功插入QKI-7编码区cDNA的PET32b(+)原核表达载体用热休克法转化BL21(DE3) 感受态细菌, 以IPTG诱导6×His-QKI-7融合蛋白的表达, 分别经金属鳌合柱、反向柱和强阴离子交换柱进行层析纯化.经SDS-PAGE和Western blot鉴定后, 应用纯化的融合蛋白, 分别以弗氏佐剂、聚丙烯酰胺凝胶、 NC膜作为佐剂免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, 并以Western blot进行检测.结果:经表达并纯化的QKI-7蛋白纯度达到95%以上, 应用纯化的融合蛋白以弗氏佐剂作为佐剂免疫新西兰大白兔后获得高滴度, 特异性的抗QKI的多克隆抗体.结论:成功地表达并纯化了QKI-7蛋白, 并制备了高滴度、高特异性的抗QKI多克隆抗体.采用弗氏佐剂作为免疫佐剂进行免疫的效果优于聚丙烯酰胺凝胶和NC膜.

关键词：QKI-7、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30470387

在线出版日期：2007-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：257-259