RNA干扰抑制MyD88表达对小鼠骨髓树突状细胞生物学活性的影响

摘要：

目的:采用RNA干扰技术抑制小鼠骨髓树突状细胞(DC)髓样分化因子88(MyD88)的表达, 并检测其对细胞生物学活性的影响, 为DC的临床应用奠定基础.方法:针对MyD88基因, 采用化学合成法合成3对MyD88 siRNA(序列1、序列2及序列3), 并转染DC2.4 细胞.采用半定量RT-PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测DC MyD88的表达情况, 筛选其中一对高效RNA(序列3)转染DC2.4 细胞(RNA干扰组), 以未转染RNA的DC2.4细胞作为对照组, 分别给予1mg/L的脂多糖(LPS)刺激.流式细胞术(FCM)检测DC细胞表面CD80、 CD86及MHC-Ⅱ分子的变化, ELISA法检测DC分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-12(IL-12)的浓度, 免疫细胞化学检测DC核因子-κB(NF-κB)的表达, 混合淋巴细胞培养检测T细胞增殖能力, 观察RNA干扰对LPS促DC成熟的影响.结果:与空白对照组相比, 序列2组及序列3组DC的mRNA和蛋白质表达分别降低90%和85%、 92%和88%, 差异有统计学意义; 脂质体对照组、无义siRNA对照组及序列1组DC的mRNA和蛋白质表达无显著差异.经LPS刺激后, 与对照组相比, RNA干扰组CD80、 CD86及MHC-Ⅱ分子的表达, TNF-α、 IFN-γ及IL-12的浓度及T细胞增殖能力均显著下降, 且未见明显NF-κB核转位.结论:RNA干扰技术能显著下调小鼠DC MyD88的表达, 并显著抑制LPS促DC成熟的效应, 为以DC MyD88为靶向、相关疾病的基因治疗提供了新思路和手段.

关键词：树突状细胞、MyD88、RNA干扰、脂多糖

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30471715

在线出版日期：2007-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：193-196