HLA-A*0203-BSP的表达和复性及其四聚体的鉴定

摘要：

目的:优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽(BSP)与HLA-A*0203重链胞外域的融合蛋白(HLA-A*0203-BSP),并制备负载HLA-A*0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3596-604的四聚体( HLA-A*0203/SVR).方法:以HLA-A*0203-BSP原核表达载体转化E.coli BL21(DE3)菌株,优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达.通过稀释法复性可溶性HLA-A*0203/SVR单体,然后以BirA对其进行生物素化,并以阴离子交换树脂纯化.将纯化的HLA-A*0203/SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4:1的比例混合形成四聚体,通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性.结果:当IPTG的浓度为0.4 mmol/L,于37℃诱导过夜后,融合蛋白的表达最多.该重组蛋白相对分子质量(Mr)为34000,与HLA-A*0203-BSP的理论Mr相一致.该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分,约占菌体总蛋白的30%.负载抗原肽的可溶性HLA-A*0203/SVR单体是在同时存在HLA-A*0203-BSP、β2微球蛋白及HLA-A*0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得.该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4: 1的比例混合后即形成四聚体.流式细胞术(FCM)分析证实,该四聚体具有与HLA-A2+供者特异性CTL结合的活性.结论:HLA-A*0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达.以此蛋白制备的HLA-A*0203/SVR四聚体具有与HLAA2+供者特异性CTL结合的活性,为研究HLA-A*0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础.

关键词：HLA-A*0203、EB病毒、四聚体、原核表达、融合蛋白、包涵体

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分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金30230350;国家自然科学基金30371651;30572199

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：97-101