人Cyclin E原核表达载体的构建及表达

摘要：

目的:构建人Cyclin E基因原核表达载体, 并在E.coli BL21中表达并纯化.方法:PCR扩增人Cyclin E基因片段, 并将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中, 构建重组质粒pET32a(+)-Cyclin E.经限制性内切酶EcoR I 与Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21, 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果:获得全长约为1 200 bp的人的Cyclin E基因片段.以构建的重组质粒pET32a(+)-Cyclin E转化E.coli BL21后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约60 000的融合蛋白.经SDS-PAGE、 Western blot分析显示, 诱导表达的蛋白为Cyclin E.结论:成功地构建了表达载体pET32a(+)-Cyclin E, 并表达出重组蛋白His-Cyclin E, 为进一步筛选在体内外能与Cyclin E和CDK2结合的新蛋白奠定了基础.

关键词：Cyclin E、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技攻关项目2004BA519A64

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：92-93