细胞色素P450 3A4抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:制备兔抗人细胞色素P450 3A4(CYP3A4)抗体及其特性鉴定.方法:利用生物信息学方法分析CYP3A4蛋白的序列, 根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列, 合成CYP3A4多肽, 与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联, 免疫日本大耳白兔制备抗CYP3A4抗体.辛酸-硫酸铵法纯化抗体, 间接ELISA测定抗体的效价及相对亲和力常数, Western blot鉴定其特异性, 免疫组化进行定位.结果:获得针对小分子CYP3A4的抗体.该抗体效价为1:16 000;相对亲和力常数在105～106 M-1, 具有实用价值;可与CYP3A4合成肽及天然CYP3A4出现特异性反应;可识别正常人肝脏组织CYP3A4;Western blot的结果显示, 该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为46 000.结论:合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性, 可用于制备相应的抗体.制备的兔抗CYP3A4合成肽抗体可应用于ELISA、 Western blot和免疫组化实验.

关键词：CYP3A4、合成肽、多克隆抗体

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分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2004BA711A20;黑龙江省教育厅振兴老工业基地重大科技项目115129d11

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：79-81