抗大豆Ⅱ号亚型钙调素单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:制备抗大豆Ⅱ号亚型钙调素(SCaM-2)单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:从含有pSCaM-2的大肠杆菌BL21中, 提取并纯化SCaM-2.以其作为抗原免疫BALB/c小鼠后, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞经细胞融合、筛选及克隆化, 建立稳定分泌SCaM-2 mAb的杂交瘤细胞株, 并对抗SCaM-2 mAb进行鉴定.结果:经两次细胞融合, 共获得10株可稳定分泌抗SCaM-2 mAb的杂交瘤细胞株.对其中3株杂交瘤细胞制备的腹水mAb(6F11F3、 7C5E9、 7E10E2), 用间接ELISA及免疫印迹实验表明, 在高稀释度时, mAb 6F11F3可识别SCaM-1和SCaM-2, 而mAb 7C5E9和7E10E2可分别识别SCaM-4和SCaM-5.Ig亚类鉴定结果表明, mAb 6F11F3和7C5E9均为IgG2a, mAb 7E10E2为IgG1.相加实验的结果显示, mAb 6F11F3和7C5E9可能识别SCaM-2相同的抗原表位;而mAb 7E10E2可能识别不同的抗原表位.mAb 6F11F3对SCaM-2的亲和常数为(2.127±0.418)×106M-1, mAb 7C5E9对SCaM-4的亲和常数为(9.69±2.406)×106M-1, mAb 7E10E2对SCaM-5的亲和常数为(1.203±0.429)×107M-1.结论:制备了可识别不同SCaM亚型的mAb 6F11F3、 7C5E9及7E10E2, 为研究SCaM的特性及功能提供了重要的制剂.

关键词：大豆、钙调素、亚型、单克隆抗体

所属期刊栏目：23

分类号：Q392.11(人类遗传学)

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：72-74