EGFRvIII/PEP-3 cDNA与HBcAg重组基因原核表达载体的构建、表达与免疫分析

摘要：

目的:构建EGFRvIII与HBcAg重组基因的原核表达质粒, 进行原核表达、纯化, 观察表达蛋白的免疫原性和抗原性.方法:通过双酶切从pGEM-T Easy/PEP-3载体获得编码EGFRvIII突变区的cDNA片段, 插入去除了主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中, 获得重组质粒pGEMEX/c-PEP-3-c, 将重组基因亚克隆于原核表达载体pET28a(+)中, 通过IPTG诱导蛋白表达, 利用Ni2+-NTA亲和层析法对融合蛋白进行纯化;用融合蛋白常规免疫BALB/c小鼠, 用间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度. 结果:经酶切鉴定、序列测定证实融合基因已插入pET28a(+)载体中, 融合基因序列与设计序列完全一致.原核表达后表达量占沉淀全菌蛋白的56%, 纯化产物占总蛋白的92%, 浓度约8 g/L.BALB/c小鼠经4次免疫后, 其血清中中和抗体的滴度可达1:16 000, 第6次免疫后血清中中和抗体的滴度达到1:2.56×105, 抗PEP-3抗体滴度达到1:1.28×105, 抗HBcAg抗体滴度小于1:4×103.结论:融合基因PEP-3-HBcAg在大肠杆菌中可获得高效表达, 表达的融合蛋白可以诱导小鼠产生高滴度和高特异性中和抗体, 从而为高表达EGFRvIII恶性肿瘤基因工程疫苗的研究奠定基础.

关键词：重组基因、EGFRvIII、HBcAg、原核表达、免疫原性

所属期刊栏目：23

分类号：R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30600744

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：21-24