GFP mRNA在树突状细胞中的转染及其影响因素分析

摘要：

目的: 探讨绿色荧光蛋白(GFP)mRNA在树突状细胞(DC)中的转染及其影响因素.方法: 选用gfp报告基因, 在体外利用含T7 RNA聚合酶的mMESSAGE RNA转录试剂盒, 合成含有帽子结构的GFP mRNA, 通过酵母多聚A聚合酶加尾, 制备结构完整的GFP mRNA.与此同时, 从人的外周血液中分离单核细胞, 并在体外经GM-CSF和IL- 4刺激分化为DC.通过转染试剂介导将合成的GFP mRNA转染到DC内并使其表达.采用流式细胞术检测其转染效率和表达水平.结果: 体外合成GFP mRNA, 经转染试剂介导, 实现了gfp基因在DC中的表达.不同的转染试剂、 mRNA用量和细胞密度对mRNA的转染效率有较大的影响.采用Transmessenger Transfection Kit转染试剂, 1 μg GFP mRNA在200 μL X-VIVO-15无血清培养基中的转染密度为2.5×109/L的DC, 可获得较好的转染效果(转染效率达27%以上).结论: 在适当的条件下, 通过mRNA转染DC可获得较高的转染效率.

关键词：树突状细胞、mRNA、GFP、基因转染

所属期刊栏目：22

分类号：R329.2+4(人体形态学)

在线出版日期：2006-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：716-719