mCD1.1分子的真核表达及其对NKT细胞的刺激作用

摘要：

目的:获得稳定表达mCD1.1分子的细胞系,研究其对肝脏和肠系膜淋巴结淋巴细胞的刺激作用.方法:分离C57小鼠的小肠上皮细胞,制备总RNA,通过RT-PCR扩增mCD1.1编码区基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1.将所得重组质粒pcDNA3.1-mCD1.1通过电穿孔法转至CHO细胞中,在含G418的的选择性培养基中筛选抗性克隆,利用RT-PCR和流式细胞术对挑取的克隆进行mCD1.1表达的鉴定.将表达mCD1.1的细胞与新分离的肝脏和肠系膜淋巴结(MLN)的淋巴细胞进行共培养,并用丝裂霉素C抑制CHO细胞的增殖,然后利用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况;另外将表达mCD1.1的CHO细胞与淋巴细胞共培养后,分离淋巴细胞,然后用PE-anti-NK1.1和Cychrome-anti-CD3对其进行标记,利用流式细胞术检测CD3细胞中NK1.1阳性细胞的比例.结果:通过RT-PCR,得到mCD1.1的编码区基因,序列与预期相符;通过多次鉴定,证明筛选得到的细胞克隆可稳定表达mCD1.1;CHO-mCD1.1细胞与新分离的淋巴细胞共培养,在有无LPS存在的情况下,均能刺激淋巴细胞发生增殖,并使CD3+细胞中NK1.1阳性细胞的比例增加.结论:表达mCD1.1的CHO细胞能够刺激NKT细胞增殖.

关键词：mCD1.1、NKT细胞、细胞增殖

所属期刊栏目：22

分类号：R392.1

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1999054103

在线出版日期：2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：579-581