野生型及突变型人白细胞介素13的原核表达及活性分析

摘要：

目的:在大肠杆菌中表达野生型和突变型重组人IL-13,经纯化复性获得具有有活性的蛋白.方法:用PCR扩增IL-13基因片段,用定点突变PCR获得其突变体(IL-13' )基因.将IL-13和IL-13'基因分别克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组体pET30a(+)IL-13和pET30a(+)IL-13',分别命名为pETIL-13和pETIL-13'.以重组体转化E.coli BL21(DE3)在IPTG诱导下进行表达.表达产物用Ni-NTA层析柱进行纯化.纯化产物用氧化还原谷胱甘肽系统透析复性后,检测其生物学活性.结果:在E.coli BL21(DE3)中表达了IL-13/IL-13' -His6融合蛋白.经 SDS-PAGE显示,融合蛋白的Mr约17 000,经Western blot证实为人IL-13.表达的融合蛋白以包涵体的形式存在,纯化后得到较高纯度的重组蛋白.复性后的包涵体检测具有生物学活性.结论:成功地获得具有生物学活性的野生型和突变型人IL-13重组蛋白,为下一步研究奠定了基础.

关键词：人IL-13、原核表达、活性分析

所属期刊栏目：22

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金30371364;黑龙江省自然科学基金ZJY04-04

在线出版日期：2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：564-567