大鼠TCR Vβ8.2基因真核表达质粒的构建及表达

摘要：

目的:构建含大鼠TCR Vβ 8.2基因的重组真核表达质粒,并检测其在体内外的表达.方法:以RT-PCR法分离Lewis大鼠脾淋巴细胞中的TCR Vβ 8.2基因片段,插入到真核表达载体pTARGET中,构建重组表达载体pTARGET-TCR Vβ 8.2,并转化E.coli JM109,经蓝白斑筛选阳性菌落,进行菌落PCR和测序鉴定.将重组质粒以肌注法免疫BALB/c小鼠,采集注射部位股四头肌处的肌肉,用RT-PCR及免疫组化染色法检测TCR Vβ 8.2基因在注射部位的转录和表达.通过脂质体介导,将重组质粒导入COS-7细胞中进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达.结果:测序鉴定证实,TCR Vβ 8.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到在肌肉组织和COS-7细胞内重组蛋白的表达.结论:成功地构建重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ 8.2,并在体内体外均可检测到其转录和表达,为进一步进行TCR VβDNA疫苗的研究奠定了基础.

关键词：胶原诱导性关节炎、自身反应性T细胞、TCR Vβ基因、真核表达

所属期刊栏目：22

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：北京市自然科学基金7052011;北京市教委科技发展计划项目2002KJ085

在线出版日期：2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：560-563