人金属硫蛋白MT-2a的原核表达、纯化及其抗血清的制备

摘要：

目的: 在大肠杆菌中表达人金属硫蛋白(MT)-2a与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,并制备兔抗MT-2a抗血清.方法: 人MT表达菌株BL21/GST-MT-2a经IPTG诱导、超声裂解及Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化后,以可溶性融合蛋白GST-MT-2a免疫新西兰大白兔,制备抗血清.用双向凝胶免疫扩散和ELISA检测抗血清的效价,用Western blot检测抗血清的特异性.结果: 经诱导表达及亲和层析纯化,每L菌液可获得可溶性融合蛋白GST-MT-2a 38 mg.以此融合蛋白免疫新西兰大白兔制备的抗血清,双向免疫扩散效价＞1∶ 256,ELISA 效价＞1×10-7.Western blot检测证明抗血清的特异性良好.结论: 人MT-2a在大肠杆菌中得到高效表达,以纯化的GST-MT-2a可溶性融合蛋白免疫家兔得到高效价、高特异性的抗血清,为进一步研究MT-2a蛋白的生物学功能提供了重要的制剂.

关键词：金属硫蛋白、原核表达、融合蛋白、抗血清

所属期刊栏目：22

分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划20335020;国家重点基础研究发展计划973计划2003CCC00700

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：530-532