兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定

摘要：

目的: 制备兔抗人唾液酸转运蛋白(sialin)的抗体,并进行特性鉴定.方法: 应用RT-PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列,构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin,测序鉴定后,转化大肠杆菌JM109,在0.1 mmol/L IPTG的诱导下表达GST-sialin融合蛋白.经SDS-PAGE鉴定后,利用GSTrap FFTM柱纯化融合蛋白,并以其免疫家兔制备抗人sialin抗体.用ELISA法测定兔抗sialin血清的效价;用Western blot及免疫细胞化学等方法鉴定抗血清的特异性.结果: 构建了重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin;以其转化大肠杆菌在IPTG诱导下,获得以可溶性形式表达的GST-sialin融合蛋白;表达的GST-sialin经GSTrap FFTM柱纯化后,免疫家兔制备出抗sialin抗血清,ELISA法测定抗血清的效价为1∶ 32 000.Western blot鉴定表明,制备的抗sialin抗体可特异地识别HSG细胞中相对分子质量(Mr)约55 000的sialin蛋白.免疫细胞化学检测表明,sialin抗血清识别的抗原定位于HSG细胞的细胞质和胞核.结论: 成功地制备出兔抗人sialin抗血清,为进一步研究sialin在涎腺组织的功能奠定了基础.

关键词：唾液酸转运蛋白、融合蛋白、原核表达、抗体制备

所属期刊栏目：22

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金30430690

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：521-523,538