去唾液酸糖蛋白受体特异性单链抗体的优化表达及亲和常数的测定

摘要：

目的: 表达及纯化抗去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的单链抗体的可溶性,并测定其亲和常数.方法: 用噬菌体C1克隆感染E.coli HB2151,挑取单个菌落接种于2×TY培养基中,于37℃震荡培养过夜.将培养物作1∶ 100稀释并转种后,用终浓度为0.25、0.5、1.0 mmol/L的IPTG,分别在37℃、25℃和20℃下诱导表达过夜.取其培养上清,用饱和硫酸铵沉淀后,以120 g/L SDS-PAGE分析.另外,将饱和硫酸铵沉淀物用30 mL PBS重新溶解、透析除盐后,用Ni2+螯合柱进行纯化,再以120 g/L SDS-PAGE鉴定纯化scFv C1的纯度.用非竞争酶免疫法测定scFv的亲和常数.结果: 用0.5 mmol/L IPTG在25℃诱导过夜,表达的scFv C1的量较多,其相对分子质量(Mr)约为28 000,以可溶性的形式存在于培养基中.通过Ni2+亲和柱纯化后scFv C1的纯度在95%以上,产量约为0.8 mg/L.scFv的亲和常数为(2.31±0.36)×10-7 mol/L.结论: 以筛选的C1噬菌体感染E.coli HB2151后可表达低亲和力的可溶性scFv,对肝癌的基因治疗具有潜在的应用价值.

关键词：去唾液酸糖蛋白受体、单链抗体、表达、亲和常数

所属期刊栏目：22

分类号：R392.11

资助基金：湖北省科技攻关项目AA301C43

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：504-506