10.3321/j.issn:1007-8738.2006.04.001
小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响
目的: 研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/ T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBTLAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响.方法: 采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mBTLA cDNA.将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coli BL21 (DE3),以1 mmol/L的IPTG诱导表达.提取包涵体,经变性、负性后,采用Glutathione Sepharose 4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext.将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响.结果: 成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体.变性、复性,经Glutathione Sepharose 4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白.经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43 000,同预期的结果一致.流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断.未检测到GST-mBTLAext DC2.4上B7-2的表达有影响.结论: BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义.
树突状细胞、B/T淋巴细胞弱化因子、B7分子、原核表达
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R392.12
国家研究发展基金2001cb500008;广东省博士启动基金20040487056
2006-07-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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