腺病毒细菌重组系统表达Crg-2蛋白的实验研究

摘要：

目的:利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白.方法:首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Western blot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性.结果:穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Western blot检测有一接近Mr10 000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用.结论:采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2.

关键词：腺病毒、同源重组、趋化因子、crg-2

所属期刊栏目：22

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国科学院资助项目30400016;第四军医大学校科研和教改项目4138A4324

在线出版日期：2006-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：283-285