ctB和ureⅠ双基因融合表达及其免疫特性分析

摘要：

目的:构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure Ⅰ)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ure Ⅰ,并初步研究融合蛋白Ct B/Ure Ⅰ的表达特性和免疫特性.方法:PCR从pUC18 ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureⅠ的ureⅠ基因5'端插入ctB基因,构建ctB和ure Ⅰ双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ure Ⅰ,转该质粒于E.coli BL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌.IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-Pro Analizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠.用Western blot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性.结果:工程菌含完整的ctB和ure Ⅰ基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%.在22℃,1 mmol/L IPTG诱导4 h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%.Western blot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体.结论:成功构建了能表达CtB/Ure Ⅰ蛋白的大肠杆菌表达菌株.对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和Ure Ⅰ的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础.

关键词：幽门螺杆菌、霍乱毒素B亚单位、尿素膜通道蛋白、融合表达、免疫特性

所属期刊栏目：22

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：科技部重点项目96-A23-06-02

在线出版日期：2006-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：276-279