HLA-A2+供者外周血hCMV特异性CTL的定量及其表型分析

摘要：

目的: 利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A*0201(A2-NLV)四聚体, 探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用.方法: 取HLA-A2+供者外周血, 以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色, 然后以anti-CD3-FITC和anti-CD8-APC标记, 流式细胞术分析染色结果, 寻找四聚体最佳染色条件, 并分析特异性CTL的表型和活化抗原表达.结果: 以全血样进行四聚体染色结果优于分离的PBMC.A2-NLV四聚体用量为0.3 μg时, 与100 μL全血于4℃温育1 h, 特异性染色效果最佳, 而与CD8- T细胞非特异性结合很低.以此优化条件进行特异性CTL表型分析, 结果显示CD28阳性的A2-NLV四聚体特异性CTL的百分率较非特异性CTL低, 表达CD57的百分率较非特异性CTL高, CD25分子只表达于活化的特异性CTL上.结论: 通过对染色条件进行优化可明显提高四聚体染色的特异性, 降低非特异性结合, 优化的四聚体染色法能用于抗原特异性CTL的表型和功能分析.

关键词：HLA-A2四聚体、巨细胞病毒、CTL、四聚体染色

所属期刊栏目：22

分类号：R392.12

资助基金：中国科学院资助项目30230350;中国科学院资助项目30371651;科技部科研项目G200057006

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：247-251