兔抗人CXCR3-B分子N端多肽多克隆抗体的制备与初步应用

摘要：

目的: 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法: 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用.结果: 分别化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 纯化后多肽纯度分别为98%、 88.54%及80%, 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价分别为1∶ 32 000(0.1 mg/L), 1∶ 4 000(3 mg/L)和1∶ 1 000(10 mg/L).3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量(Mr)约为50的CXCR3-B分子, 相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞.结论: 所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验, 为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具.

关键词：CXCR3-B、多克隆抗体、多肽抗原

所属期刊栏目：22

分类号：R392

资助基金：科技部科研项目2002-CB513106,2001CB510200;国家科技攻关项目2004BA711A20

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：223-226