以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链

摘要：

目的: 以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板, 筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.方法: 利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因, 克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中, 电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库.通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序, 对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定, 以M13K07辅助噬菌体超感染, 利用亲和纯化的γ-sm为抗原, 对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定.最后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测.结果: 构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库.利用纯化的γ-sm 3轮亲和淘筛后, 5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体.ELISA进一步检测表明, 5个克隆均呈特异性阳性反应, 其中2个克隆亲和力较高, 测序显示其所含轻链基因序列完全相同, 可变区来源于IGKV4-1*01胚系基因家族.结论: 利用鼠源Fd片段为模板, 导向筛选杂合噬菌体库, 成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链.

关键词：噬菌体抗体库、导向筛选、前列腺癌

所属期刊栏目：22

分类号：R392.11

资助基金：国家科技攻关项目2001AA215321;国家科技专项基金2002AA2Z3109

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：196-199