抗人CD40人-鼠嵌合抗体的构建及其表达

摘要：

目的: 通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体.方法: 从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA, 用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAb VH和VL的DNA编码区基因.根据序列分析的结果, 设计引物扩增VH和VL基因相应的信号肽序列.利用基因重组技术, 将mAb 5C11的VH、 VL基因及其相应信号肽序列与人IgG1的CH基因、 Cκ链基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/h5C11.用脂质体法将其导入293T细胞株中进行瞬时表达.利用流式细胞术对表达产物进行鉴定.结果: NCBI基因数据库Blast的结果显示, 克隆的基因序列符合小鼠VH、 VL基因及其信号肽序列的特征.表达质粒pIRES/h5C11的构建正确, 并在293T细胞株中获得瞬时表达.表达的抗人CD40的人-鼠嵌合抗体和mAb 5C11具有相同的抗原结合位点.结论: 成功地克隆了鼠抗人CD40 mAb V区编码基因, 并实现了可溶性抗人CD40的人-鼠嵌合抗体在293T细胞中的瞬时表达.

关键词：单克隆抗体、嵌合抗体、CD40

所属期刊栏目：22

分类号：Q254;R392.1(细胞生理学)

资助基金：高比容电子铝箔的研究开发与应用项目2001AA215341;国家自然科学基金BK2001211;中国科学院资助项目30330540

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：189-192