猪链球菌2型人源分离株截短的溶菌酶释放蛋白基因的克隆及原核表达

摘要：

目的: 克隆及表达猪链球菌2型(S.suis 2)人源分离株Habb截短溶菌酶释放蛋白(MRP)基因.方法: 根据S.suis 2 mrp基因的序列设计引物, 克隆和分析江苏海安患者分离株Habb截短mrp基因(tmrp), 构建原核表达质粒pGEX4T-2-mrp.在大肠杆菌中诱导带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的融合蛋白tMRP-GST表达;经亲和层析法纯化后, 用凝血酶酶切去除重组蛋白中的GST, 制备纯化的截短MRP(tMRP)抗原.用Western blot检测重组抗原的活性.结果: 序列分析表明, 获得的tmrp基因长957 bp;原核表达的融合蛋白tMRP-GST的相对分子质量(Mr)约61 000;凝血酶处理的tMRP抗原的Mr约为35 000.Western blot分析显示, MRP-GST、 tMRP蛋白均可与MRP多克隆抗血清发生特异性反应.结论: 成功地克隆人源分离株Habb截短的mrp基因, 并在原核系统实现高效表达, 制备的纯化抗原tMRP具有良好的抗原性, 为开展相关免疫学研究奠定了基础.

关键词：猪链球菌2型、溶菌酶释放蛋白、融合表达

所属期刊栏目：22

分类号：R378.1+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重大传染病科技攻关项目2003BA712A03-05

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：178-180