HAI-1基因不同功能域的原核表达载体构建及融合蛋白表达

摘要：

目的: 分段克隆1型肝细胞生长因子激活剂抑制因子(HAI-1)基因的功能域并在大肠杆菌中表达, 为进一步研究HAI-1的生物学功能打下基础.方法: 针对HAI-1的不同功能域设计相应的5对引物, 分别扩增KD1、 KD1+LDLR、 KD2、 LDLR+KD2和KD1+LDLR+KD2片段.将PCR产物克隆至pGEM-T Easy载体中并经测序鉴定.将5个cDNA片段亚克隆至具有6个组氨酸标签(His-Tag)的原核表达载体pIVEX2.3-MCS中.以上述表达不同功能域的载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株, 用IPTG诱导融合蛋白的表达, 表达产物以Western blot进行鉴定, 并进一步通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的KD1+LDLR+KD2融合蛋白.结果: 成功地构建了HAI-1各功能域基因片段的原核表达载体.Western blot分析证实, 在大肠杆菌BL21(DE3)中分段表达了5种HAI-1不同功能域的His-Tag融合蛋白, 并通过亲和层析法纯化到了相对分子质量为22 200的KD1+LDLR+KD2 融合蛋白.结论: 重组质粒pIVEX2.3-MCS/HAI-1能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达, 纯化的融合蛋白可用于研究HAI-1不同功能域的生物学作用.

关键词：1型肝细胞生长因子激活剂抑制因子、克隆、原核表达、融合蛋白

所属期刊栏目：22

分类号：R73-3;Q343.1(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目30271450;浙江省自然科学基金300466

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：174-177