人源性抗HBsAg单链Fab基因在Pichia pastoris中的表达

摘要：

目的:研究重组Fab的结构与亲和活性的关系.方法:通过重叠PCR,将人源性抗HBsAg Fab的H和L链基因融合构建单链Fab基因,并将其转入毕赤酵母表达载体pPICZαA中.以单链Fab基因表达载体通过氯化锂转化法转化毕赤酵母GS115.将获得的重组酵母在摇瓶中培养进行重组单链Fab的可溶性表达.表达上清经硫酸铵沉淀及亲和层析纯化后,用直接ELISA检测表达产物和纯化Fab的活性.结果:SDS-PAGE和Western blot分析显示,单链Fab在毕赤酵母中获得分泌型表达.薄层扫描显示,在摇瓶中培养毕赤酵母表达的单链Fab约为5～10 mg/L.经亲和层析纯化获得纯度达97.8%的重组单链Fab.经直接ELISA测定的结果显示,重组单链Fab具有较好的结合HBsAg的活性.结论:通过重叠PCR构建的融合单链Fab基因,可成功地在毕赤酵母中获得分泌型表达,表达产物具有较好的结合HBsAg的活性.

关键词：HBsAg、单链Fab、毕赤酵母

所属期刊栏目：22

分类号：R373.2+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中国科学院资助项目30473607;广东省广州市科技局科研项目2003J1-C0171

在线出版日期：2006-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：71-73