BAC5-scFv的表达、复性及活性检测

摘要：

目的:探讨以包涵体形式表达的抗鼻咽癌单克隆抗体(mAb)BAC5的单链抗体(BAC5-scFv)的纯化、复性方法,并对其活性进行检测.方法:扩增pET-22b-scFv质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,培养、破菌后,分离和变性包涵体,用Ni-NTA His Bind层析柱纯化变性的scFv.经稀释、透析及尿素梯度凝胶层析柱3种方法进行复性.用细胞免疫组化染色和蛋白印迹法(Western blot),鉴定复性后的BAC5-scFv的免疫活性.结果:Ni-NTA His Bind亲和层析柱能有效纯化变性的scFv.以尿素梯度凝胶层析柱复性的蛋白回收率最高.免疫细胞化学染色法检测及Western blot分析证实,复性后的BAC5-scFv可与CNE2细胞上的抗原特异性结合.结论:以包涵体形式表达的BAC5-scFv经变性、纯化及复性后,获得良好的免疫活性,为大量制备具有活性的BAC5-scFv,并用于鼻咽癌的放射免疫显像和治疗研究奠定了基础.

关键词：包涵体、单链抗体、复性、鼻咽癌

所属期刊栏目：22

分类号：R739.63(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目300070231;广东省重点实验室基金99B07703S;中山大学校科研和教改项目2002c-1-11

在线出版日期：2006-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：67-70