人细胞增殖相关激酶plk3基因逆转录病毒载体的构建及对细胞增殖的影响

摘要：

目的:构建人细胞增殖相关激酶基因plk3的逆转录病毒载体(RV),观察该基因对细胞增殖和细胞周期的影响.方法:将plk3基因亚克隆至pMSCV-puroR载体中,经酶切和测序鉴定,制备高滴度的RV,以流动感染法高效感染,半固体集落培养法测定基因导入率.用嘌呤霉素筛选后,获得K562-plk3-puroR和HL60-plk3-puroR细胞.以野生型细胞和导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞作为对照,用PCR鉴定基因的导入,并测定细胞周期及凋亡率等,研究plk3基因导入对细胞的影响.结果:获得pMSCV-plk3-puroR质粒并经酶切和测序证实.对K562和HL60细胞的基因导入率,分别达82.3%±3.70%和62.9%±4.94%(n=3).经嘌呤霉素筛选后,转基因细胞的阳性率>99%.K562-plk3-puroR和HL-60-plk3-puroR转基因细胞的增殖曲线比对照细胞降低(P<0.01);而导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞的增殖曲线与野生型细胞相比较无显著差异.与K562细胞相比较,常规培养时,处于G0～G1期的K562-plk3-puroR细胞增多[(49.7±3.38)% vs (43.9±2.34)%,P=0.03].以无血清培养基培养10 h后,进入S期的K562-plk3-puroR细胞减少[(43.6±3.74)% vs (54.5±1.52)%,P=0.02],凋亡率降低[(1.3±0.31)% vs (3.4±0.37)%,P=0.01].结论:构建了plk3基因的逆转录病毒载体,发现plk3基因的导入可延缓细胞增殖,并抑制细胞进入增殖周期.

关键词：逆转录病毒载体、plk3基因、细胞周期、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族

所属期刊栏目：22

分类号：R730.51;Q78(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目39970670;30371259;南京医科大学校科研和教改项目NYD-99015

在线出版日期：2006-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：29-32