人NRAGE基因重组腺病毒载体的构建及其对293细胞细胞周期的影响

摘要：

目的:构建hNRAGE基因的重组腺病毒载体,并研究其对293细胞细胞周期的影响.方法:采用PCR方法扩增hNRAGE基因片段,并亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdTrack-CMV/hNRAGE.经测序检测后,用Pme I酶切使pAdTrack-CMV/hNRAGE被线性化,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组.经Pac I酶切鉴定后,用磷酸钙法转染QBI-293A细胞,包装成重组体腺病毒Ad-hNRAGE颗粒.利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中GFP报告基因的表达,观察重组腺病毒的产生,测定病毒颗粒的浓度.用Western blot检测目的基因的表达.采用MTT法检测293细胞的活力,用流式细胞术分析hNRAGE基因对293细胞周期的影响.结果:成功地构建hNRAGE重组腺病毒载体.Western blot检测结果证实,hNRAGE基因可在293细胞中表达.收获病毒后,经测定病毒颗粒的浓度大约为6.5×109个/μL.转染了重组腺病毒Ad-hNRAGE的293细胞与正常细胞相比较,增殖率显著降低,G0-G1和G2-M期的细胞增多,S期的细胞明显减少.结论:hNRAGE基因可能有抑制293细胞生长的作用.

关键词：hNRAGE、腺病毒载体、同源重组、细胞周期

所属期刊栏目：22

分类号：Q291

资助基金：中国科学院资助项目30371589

在线出版日期：2006-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：18-21