GAP- 43干扰RNA表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的: 构建GAP-43小干扰RNA(SiRNA)的表达载体并在大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12中验证其抑制效果.方法: 利用设计软件根据GAP-43 mRNA序列设计特异性SiRNA插入序列, 体外合成该序列后将其定向克隆入真核表达载体pRNAT H1.1/Neo.以LipofectamineTM 2000试剂转染GAP-43-SiRNA表达载体至PC12细胞中, 以NGF诱导PC12细胞GAP- 43的表达, 以免疫组化方法鉴定GAP-43-SiRNA对GAP-43表达的抑制效果.结果: DNA测序证实合成的并被克隆入真核表达载体pRNAT H1.1/Neo的SiRNA插入序列完全正确,GAP-43-SiRNA表达载体转染PC12细胞后可特异性抑制NGF诱导的PC12细胞的GAP- 43的表达.结论: GAP-43-SiRNA表达载体构建成功, 为后期研究GAP-43在少突胶质细胞前体上表达的意义奠定了基础.

关键词：GAP-43、小干扰RNA、表达载体、PC12

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：上海市科技发展基金00JC14021;国家重点基础研究发展计划973计划2003CB515302

在线出版日期：2005-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：771-772,774