昆虫抗冻蛋白DAFP的原核表达、纯化和抗血清制备

摘要：

目的: 制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清.方法: 根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi: 2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX- 4T-1和pMAL-p2x中,在大肠杆菌中进行表达.表达的融合蛋白经Glutathione Sepharose 4B纯化后,免疫小鼠制备抗DAFP的抗血清,抗体的效价及特异性分别采用ELISA和Western blot 进行检测.结果: SDS-PAGE检测表明,人工合成的dafp基因在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为38 000的可溶性融合蛋白.以该融合蛋白免疫小鼠所制备的抗体,其ELISA滴度为1∶ 5 000, Western blot证实BL21/pGEX- 4T-1-dafp菌和TB1/pMAL-p2x-dafp菌的表达产物可特异性地与该抗体结合.结论: 在大肠杆菌中成功地表达了DAFP的融合蛋白并制备出抗融合蛋白的鼠抗血清,为进一步研究DAFP的特性奠定了基础.

关键词：昆虫、抗冻蛋白、原核表达、抗血清、蛋白印迹

所属期刊栏目：21

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：科技部专项基金2003CCA01000

在线出版日期：2005-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：727-730