人TIM-3在真核细胞的表达及稳定转染细胞株的建立

摘要：

目的:构建人TIM-3真核表达载体, 在真核细胞中表达人TIM-3, 建立稳定转染细胞株.方法:设计特异性引物, 利用PCR技术扩增出TIM-3全编码区基因片段, 插入到真核表达载体pIRES2EGFP中, 重组质粒pIRES2EGFP-hTIM-3用脂质体转染法转染哺乳动物细胞, 以流式细胞术(FCM)和Western blot分析蛋白质的的表达, 借助FCM和选择性培养基筛选建立稳定转染细胞株.结果:成功构建了pIRES2EGFP-hTIM-3真核表达载体, 转染哺乳动物细胞COS-7和CHO后, FCM和Western blot分析证实TIM-3高效表达于细胞膜表面, 建立了稳定转染的CHO细胞株.结论:成功构建了人TIM-3真核表达载体, TIM-3高效表达在转染的哺乳动物细胞表面, 并建立了稳定转染的细胞株.为进一步研究TIM-3及其配体的生物学功能以及制备和筛选抗人TIM-3 mAb提供了条件.

关键词：TIM-3、真核表达、流式细胞术

所属期刊栏目：21

分类号：R392.11

在线出版日期：2005-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：707-709,713