人IL-24基因的克隆、 表达、 纯化及体外诱导肿瘤细胞凋亡的研究

摘要：

目的: 克隆人白细胞介素-24(IL-24)基因, 在大肠杆菌中融合表达,纯化复性,研究此融合蛋白的抗肿瘤活性.方法: 分离人外周血单个核细胞, ConA刺激培养, 提取细胞总RNA, RT-PCR技术克隆人IL-24基因.将IL-24插入到pET32a(+)中,构建重组表达载体IL-24/pET32a,IPTG诱导在E.coli表达.Edman法N端测序,将鉴定正确的蛋白亲合层析纯化.MTT比色法体外分析杀伤肿瘤细胞的活性.结果: 获得人IL-24基因,序列分析与GenBank公布一致.表达载体用双酶切和PCR鉴定正确.重组工程菌经IPTG诱导后表达相对分子质量(Mr)约为35 000 的融合蛋白.N端测序正确, 鉴定该蛋白以包涵体形式表达.包涵体经洗涤、溶解后,亲合纯化得到纯度大于95%的融合蛋白.复性后表达产物能显著诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡(P<0.05).结论: IL-24融合蛋白在原核细胞中高效表达,并获得高纯度、在体外明显诱导乳腺癌细胞凋亡的重组蛋白,为后续的研究提供实验基础.

关键词：人IL-24、克隆、表达、亲和层析、抗肿瘤活性

所属期刊栏目：21

分类号：R392;Q786

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA21516

在线出版日期：2005-12-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：693-696