10.3321/j.issn:1007-8738.2005.05.014
Tat-p53融合蛋白的表达、纯化及其转导活性
目的: 原核表达野生型p53与Tat PTD (protein transduction domain)的融合蛋白,检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率. 方法: 利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导表达并进行纯化.以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清.将Tat-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测Tat-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率. 结果: 成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体,表达纯化了Tat-p53融合蛋白及p53蛋白,制备p53特异的抗血清,证实Tat-p53可以高效的转入HepG2细胞内.结论:Tat-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析,为应用Tat-p53融合蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了基础.
Tat、p53、蛋白转导域、肿瘤
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R730.23.1(肿瘤学)
2005-10-20(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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