抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达

摘要：

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段.方法:将抗人肝癌mAb cFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定.将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果:成功地表达抗人肝癌mAb HAb18的cFab,表达水平为26mg/L.Western blot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性.结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础.

关键词：肝癌、单克隆抗体、cFab、毕赤酵母、分泌表达

所属期刊栏目：21

分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA215101

在线出版日期：2005-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：342-346