碱性MAGE家族新成员restin在大肠杆菌中的表达和抗体制备

摘要：

目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL-600中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用.方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区.将其克隆人大肠杆菌表达载体中.经过温度诱导获得restin表达蛋白.利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清.以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布.结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000.将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Western blot检测其效价为1:800.间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内.结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件.

关键词：细胞静息相关因子(restin)、抗血清、表达、间接免疫荧光

所属期刊栏目：21

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30271457

在线出版日期：2005-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：309-311