10.3321/j.issn:1007-8738.2005.03.002
单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定
目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFvSEA(D227A).方法:构建scdsFv-SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达.包涵体经洗涤和复性后,用Q Sepharose HP和Hiprep26/60Sephacryl S-200HR纯化.纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性.结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.通过复性及Q Sepharose HP离子交换柱和Hiprep 26/60Sephacryl S-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg.活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高.结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法.
单链二硫键稳定抗体、产量、超抗原、SEA(D227A)、稳定性
21
Q78(基因工程(遗传工程))
国家自然科学基金30171091;国家自然科学基金30271478
2005-06-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共4页
269-272