CD40 发夹siRNA真核表达载体构建及其对CA46细胞CD40表达的影响

摘要：

目的: 构建人类CD40膜蛋白siRNA的真核表达载体, 观察其对CA46细胞上CD40表达、细胞增殖能力和凋亡的影响.方法: 合成两条编码发夹siRNA序列的单链DNA, 并将其克隆到pSilenCircle载体中, 构建含目的基因片段的重组质粒siCD40/pSilenCircle.以同样的方法, 分别构建相对应的编码反义RNA及无关基因的重组质粒antiCD40/pSilenCircle和siFly/pSilenCircle.以上述重组质粒分别瞬时转染CA46细胞后, 用流式细胞仪检测CA46细胞上CD40的表达和细胞凋亡情况, 用MTS法(改良的MTT法)测定细胞的增殖能力.结果: ①成功地构建了两个CD40发夹siRNA的真核表达载体siCD40/pSilenCircle、 两个相对应的反义RNA真核表达载体antiCD40/pSilenCircle和无关基因重组质粒siFly/pSilenCircle.②与siFly/pSilenCircle转染组相比较, siCD40/pSilenCircle转染组和antiCD40/pSilenCircle转染组CA46细胞上CD40的表达均明显减少, 但细胞的增殖能力和凋亡未发现明显变化.结论: 构建的两个CD40发夹siRNA的真核表达载体siCD40/pSilenCircle, 可有效地抑制CA46细胞上CD40分子的表达, 但不影响细胞的增殖和凋亡.RNA干扰技术可望作为一种有效地调控基因功能的方法.

关键词：RNAi、siRNA、CD40、载体构建、CA46细胞

所属期刊栏目：21

分类号：R392.12

资助基金：福建省科技厅科研项目C0310019

在线出版日期：2005-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：163-166