人胸腺基质淋巴生成素基因重组腺病毒载体的构建及表达

摘要：

目的: 构建含人胸腺基质淋巴生成素基因(TSLP)的重组腺病毒载体并表达, 以研究其免疫学功能.方法: 将由人胚肺细胞扩增得到的TSLP基因, 克隆于真核表达载体pcDNA3.1中, 再亚克隆至穿梭质粒pShuttle中, 并与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共同转化大肠杆菌.以获得的重组质粒线性化后转染HEK293细胞, 并包装成病毒颗粒.采用PCR法对重组腺病毒基因进行鉴定, 并以Western blot检测TSLP蛋白的表达.结果: 通过细菌内同源重组, 成功构建带有人胸腺基质淋巴生成素基因的重组腺病毒质粒, 转染293细胞后, 包装的重组病毒经PCR检测表明, 基因组含有目的基因, 病毒的滴度可达1×1011pfu/L.Western blot证实, 感染的肿瘤细胞中有相应基因产物的表达.结论: 通过菌内重组可高效制备带有特定基因的重组病毒.所制备的Ad-TSLP可成功表达相应基因产物, 为进一步研究这一新型细胞因子的功能奠定了基础.

关键词：人胸腺基质淋巴生成素、基因、重组腺病毒载体、真核表达

所属期刊栏目：21

分类号：R392.11

资助基金：浙江省卫生厅资助项目2004B162;浙江省科技厅资助项目2003C30012

在线出版日期：2005-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：144-146,150