用于IDDM基因治疗的rAAV2-GAD-Ig的研制

摘要：

目的: 构建重组真核表达载体pSNAV-GAD-Ig[GAD-Ig融合基因是由小鼠GAD(glutamic acid decarboxylase)基因插入到小鼠IgG3重链(Ig)基因的N端而成的], 制备含GAD-Ig融合基因cDNA的重组缺陷型腺相关病毒-2(rAAV2-GAD-Ig), 并探讨rAAV2所介导的GAD-Ig是否能诱导I型糖尿病(IDDM)动物模型-NOD(nonobese diabetic)小鼠产生特异性免疫耐受.方法: 从含GAD-Ig融合基因的中介载体BSSK(BSSK-GAD-Ig)中, 用PCR方法扩增目的基因片段, 并克隆入真核表达载体pSNAV 中, 构建重组真核表达载体pSNAV-GAD-Ig.以脂质体法将pSNAV-GAD-Ig转染到rAAV2包装细胞BHK-21中, 产生rAAV2-GAD-Ig.采用RT-PCR、 Western blot和ELISA法, 检测rAAV2-GAD-Ig感染的BHK-21细胞中目的基因的表达.应用GAD抗原体外诱导特异性T细胞的二次应答, 来检测rAAV2所介导的GAD-Ig是否能诱导NOD小鼠产生特异性免疫耐受.结果: GAD-Ig目的基因已整合到靶细胞的基因组中, 并能以分泌形式表达目的蛋白GAD-Ig.将rAAV2-GAD-Ig肌注后, NOD小鼠能产生特异性免疫耐受.结论: 获得了可用于NOD小鼠治疗研究的rAAV2-GAD-Ig.

关键词：谷氨酸脱羧酶(GAD)、GAD-Ig、pSNAV-GAD-Ig、rAAV2-GAD-Ig、特异性免疫耐受

所属期刊栏目：21

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA217061;国家重点基础研究发展计划973计划2001CB510005

在线出版日期：2005-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：24-28