结核杆菌Hsp65与EGFP融合基因的构建及DC疫苗的制备

摘要：

目的: 构建结核杆菌H37Rv株Hsp65与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因pEGHsp65, 并以其转染小鼠的树突状细胞(DC), 制备抗结核的DC疫苗.方法: 采用PCR技术, 从培养的结核杆菌H37Rv株中抽提Hsp65基因, 克隆到含有EGFP基因的质粒pEGFP-C1中, 构建pEGHsp65融合基因.以其转染Hela细胞, 在共聚焦激光扫描荧光显微镜下观测不同时间荧光表达的强弱, 并用RT-PCR检测Hsp65 mRNA的表达.以pEGHsp65融合基因转染小鼠骨髓细胞经GM-CSF和IL- 4诱导分化的DC, 用MTT比色法检测DC疫苗刺激未致敏脾细胞的增殖.结果: 用EcoRⅠ和Bgl Ⅱ双酶切鉴定证实, H37Rv株Hsp65 DNA已插入重组表达载体pEGFP-C1中.将融合基因转染入Hela细胞, 48 h转染率最高; 用RT-PCR在mRNA水平上可检测到Hsp65 mRNA的表达.用MTT比色法检测表明, 融合基因转染的DC能激活并引起未致敏的脾细胞增殖.结论: 成功地构建pEGHsp65 融合基因和以其制备的DC疫苗, 为进一步观察其治疗结核病的效应奠定了基础.

关键词：结核杆菌、Hsp65、增强型绿色荧光蛋白、树突状细胞

所属期刊栏目：21

分类号：R378.91+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：湖北省卫生厅科研项目JxlB007

在线出版日期：2005-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：13-16