人上皮细胞黏附分子融合蛋白真核表达载体的构建、表达及初步鉴定

摘要：

目的: 构建pIg-EpCAM及pEGFP-EpCAM真核表达载体, 并在COS7细胞中表达.方法: 用PCR扩增EpCAM cDNA, 酶切后分别与pIg及pEGFP两种载体连接, 用脂质体法转染COS7细胞.用免疫沉淀法检测pIg-EpCAM的表达产物; 用荧光显微镜观察EpCAM-GFP的表达.结果: DNA序列测定的结果显示, pIg-EpCAM及pEGFP-EpCAM载体的构建正确.免疫沉淀的结果显示, 转染pIg-EpCAM的COS7细胞的培养上清中含有相对分子质量(Mr)为65 000的融合蛋白, 该蛋白与抗人IgG Fc段的mAb具有良好的免疫反应性.荧光显微镜观察可见, 转染空载体pEGFP的COS7细胞中绿色荧光均匀地分布于胞质和胞核; 而转染pEGFP-EpCAM的COS7细胞中绿色荧光主要分布于细胞表面.结论: 成功地构建了两种EpCAM的真核表达载体, 并在COS7细胞中表达, 为EpCAM的功能研究创造了条件, 并为制备抗EpCAM的mAb提供了免疫原.

关键词：上皮细胞黏附分子、真核表达、增强型绿色荧光蛋白

所属期刊栏目：20

分类号：R392.12

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2001CB510004

在线出版日期：2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：765-768