人VEGF165基因真核表达质粒的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响

摘要：

目的: 构建人VEGF165基因的真核表达质粒pBudCE4.1/VEGF165, 观察其在血管内皮细胞(VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响.方法: 用RT-PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF165基因, 并将其克隆至真核表达质粒pBudCE4.1中, 对重组真核表达质粒pBudCE4.1/VEGF165进行酶切鉴定和测序.以脂质体转染法将pBudCE4.1/VEGF165导入VEC中, 用Northern blot和免疫细胞化学染色法, 分别从mRNA水平和蛋白质水平检测它们在转染的VEC中的表达, 并检测表达产物对VEC增殖的影响.结果: 人VEGF165基因的RT-PCR产物为576 bp.测序结果显示, 扩增的VEGF165基因的序列与基因文库中登录的序列完全一致.经Hind Ⅲ和BamH I酶切鉴定证实, VEGF165基因已成功地克隆至真核表达质粒pBudCE4.1中.以其转染血管内皮细胞(VEC)后, 经Northern blot杂交和免疫细胞化学染色法检测均证实VEGF165基因表达.表达产物对VEC增殖有明显的促进作用.结论: 所构建的pBudCE4.1/VEGF165真核表达质粒可在VEC中表达, 表达产物可明显促进VEC增殖, 为通过VEGF165基因转染防治移植器官内血管的狭窄奠定了基础.

关键词：真核表达质粒、血管内皮生长因子165、血管内皮细胞、基因转染、器官移植

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分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2003CB-515501;国家自然科学基金30270514

在线出版日期：2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：716-720